Metody laboratorní diagnostiky. imunologické metody

Video: CMD - Centrum molekulární diagnostiky

Imunologické metody mají významnou diagnostickou a prognostickou hodnotu v mnoha revmatických onemocnění.

Studie nespecifická imunita zahrnuje zkoumání počet leukocytů a monocytů v krevním séru, složky komplementu, mobilita odhad, fagocytární a mikrobicidní aktivitu mononukleárních fagocytového, produkci prozánětlivých cytokinů (IL-ip, IL-6, TNF-alfa, a další.).

Tyto hladiny se zvyšují komplement je pozorována v akutním zánětu, infekčních procesů a snížení - pod imunokomplexy onemocnění. Tak, snížení koncentrace C2-Cs, a složky komplementu ve srážecí reakci s antisérem typickou pro SLE, RA, ankylozující spondylitidy, vaskulitidy, ulcerativní kolitidy. To je vzhledem k aktivaci komplementu v důsledku tvorby imunitních komplexů. Určení diagnosticky významné složky komplementu v synoviální tekutině (obsah snižuje RA) v mozkomíšním moku (obsah klesá s lupus tsereb-rovaskulite) v biopsiích kůže a ledviny.

Stav buněčná imunita je hodnocena kvantitativní ukazatele (absolutní a procento T-lymfocytů, aktivních T-lymfocyty, T-helper typu I a T-cytotoxických lymfocytů) a funkční testy.

Nejčastěji používaným:
&diams- reakce leukocytů migrace inhibice (RTML) v přítomnosti antigenu a mitogenů: RTML fytohemaglutininem (PHA), concanavalinem A (Con A), alergeny hemolytického streptokoka, Staphylococcus. Reakční směs se na základě vlastnosti lymfocytů se přecitlivělosti na specifické antigeny za vzniku stabilizující lymfokiny migrační inhibiční leykotsitov- vyšší funkční aktivitu lymfocytů, menší postavy RTML;
&diams- lymfocytů transformace výbuch reakce (BTR), který se hodnotí za použití funkční aktivitu T-lymfocytů. V reakci na mitogeny (PHA), Con A, a antilymfocytární sérum et al. Transformace lymfocytů dochází lymfoblastů (větší výbuchu buňky se tvoří, tím vyšší je aktivita T-lymfocytů).
Subpopulace T-lymfocytů stanovené s monoklonálními protilátkami.

Pro vyhodnocení funkční stav humorální imunity pomocí kvantitativní stanovení imunoglobulinů v krevní plazmě. Imunoglobulinu (Ig), - jsou proteiny mající funkci protilátky a rozděleny do pěti hlavních tříd: IgG, IgA, IgM, IgD, IgE.

IgG přítomné v séru v nejvyšší koncentraci (6,39-13,49 g / l), představuje 80% aktivity protilátek. Rozlišit 4 podtřídy IgG: IgG2 (60-70%), IgG2 (20-30%), IgG3 (5-8%) a IgG4 (1-3%).

IgA je hlavní sekreční imunoglobulin nalezen ve slinách, slzách, bronchiálním a střevní sekrety a mateřským mlékem. Tajemství IgA dimer je forma obsahující J-řetězce, další peptid, nazvaný sekreční komponenta. Koncentrace IgA ve standardu je 0,7-3,12 g / l.

IgM se skládá z 5 monomerních podjednotek spojených disulfidovými můstky a J-řetězce, které tvoří pentamer. koncentrace v séru IgM obvykle činí 0,86-3,52 g / l.

IgD je ve stopových množstvích v séru, ale jedná se o základní typ imunoglobulinu přítomna na membráně B-lymfocytů. IgE hraje důležitou roli v reakcích okamžité přecitlivělosti.

Pro stanovení koncentrace hlavních tříd imunoglobulinů (IgG, IgM, IgA), za použití metody podle radiální imunodifuze nebo nefelometrické techniky, IgE - vysoce citlivé radioimunotest nebo enzymové imunoanalýzy techniky.

Stanovení koncentrace imunoglobulinů jsou použity pro diagnostiku primární nebo sekundární imunodeficience (v těchto případech je snížení koncentrace hlavních tříd imunoglobulinů), a monoklonální immunoglobulinopaty (v kombinaci s Imunoelektroforéza séru a moči).

Nejběžnější formou imunodeficitu je IgA immunodefi-op, jejichž vývoj je někdy pozorována u revmatických onemocnění, a může také probíhat proti pozadí některých léků (D-penicilamin, sulfasalazin, kaptopril a další.). Zvyšující se koncentrace IgA často pozorováno u séronegativních spondyloartropatie, hemoragická vaskulitida, Sjögrenův syndrom, psoriatické artropatie.

Často se při zánětlivých revmatických onemocnění je pozorován vývoj polyklonální Hyper.
Revmatoidní faktor (RF) jsou autoprotilátky na Fc-fragment IgG, i když může být spojeno s IgM a IgA.

Možná, že blokování revmatoidní faktor autologní IgG, což vede ke zvýšení procenta skryté, RF komplexu (s prodlouženou dobou trvání revmatoidní artritidy s vistseritami).

K identifikaci RF třídy M platí:

&diams- latexová aglutinace inertními latexové částice potažené lidským Ig. Nejvyšší ředění séra dávání aglutinační titr považovány za reakce. Titr 1:20 nebo vyšší se považuje za pozitivní;
&diams- reakce Vaaler Rosa s ovčími červenými krvinkami potažených králičí anti-ovčí červené krvinky.

Nejvyšší ředění séra dávání aglutinace diagnosticky významné, ne-li menší než 1:32.
Lupus (LE) -buněk. Přítomnost LE-buněk v důsledku přítomnosti v séru třídy IgG protilátek proti DNA-histon komplexu, které reagují s jádry jsou uvolňovány z různých buněk, jako výsledek ničení těchto buněk. LE-buňky se nacházejí v 60-70% pacientů s SLE. Jsou zralé neutrofily, pohlcují nukleární podstata zničených buněk. V cytoplazmě neutrofilů nalezeno velké homogenní začlenění (Hematoxylin krvinky).

V případě neúplného fagocytózu neutrofily nahromaděné kolem tele hematoxylin ve tvaru objímky (růžice formace jev). Výsledek detekování alespoň LE-5 buněk na 1000 bílých krvinek, se považuje za pozitivní. Jednotkové částky LE-buňky se nacházejí u 10% pacientů s RA, chronické aktivní hepatitidy, alergie na léčiva, periarteritis nodosa, systémové sklerodermie, dermatomyozitida, smíšené onemocnění pojivové tkáně.

Antinukleární protilátky (AHA) nejčastěji definována u revmatických chorob a vyskytují se ve více než 90% pacientů SZST. Jsou rodina autoprotilátek interagujících s ribonukleové kyseliny a proteiny, jádro, cytoplazmatické antigeny. AHA stanoveno nepřímou imunofluorescencí, dvojité imunodifúze a kontrelektroforeza, ELISA a imunoblotu.

Při použití nepřímé imunofluorescenční metodou v praxi existuje šest typů barviv nebo luminiscence, jádra, které jsou důležité pro diagnostiku systémových onemocnění pojivové tkáně:
&diams- homogenní zabarvení v důsledku přítomnosti protilátek proti dvouřetězcové DNA a histonů nejtypičtější SLE a lupus dávkování;
&diams- periferní skvrn způsobených cirkulujících protilátek na jaderné membrány (konkrétně pro SLE);
&diams- zrnitý barvení dochází nejčastěji, což ukazuje na přítomnost různých AHA, takže má nejnižší specifičnosti (poznamenali v SLE, RA s viscerální projevy, smíšené onemocnění pojivové tkáně);
&diams- Nukleolární (nukleolární) luminiscence v důsledku protilátkové složky jadérka se vyskytuje v systémové sklerózy, onemocnění Shegrena- ANF občas nalézt v endokrinní onemocnění (poliendokrinopatiya, diabetes typu I mellitus, zánět štítné žlázy, tyreotoxikóza), onemocnění kůže (psoriasis, pemfigus), jakož i Dosavadní stav těhotenství po transplantaci orgánů a tkání (ve vývoji reakce „štěp versus hostitel“), u pacientů na hemodialýze;
&diams- centromerickou luminiscence je pozorována ve výskytu protilátek proti centromery chromozomů (charakteristické chronicity MIC);
&diams- cytoplazmatický světlo indikuje přítomnost protilátek proti tRNA syntetázy, zejména Jo-1 (společný v dermatologii a polymyozitidy).

Metody radioaktivních a imunitního vazba, radiální imunodifuze, imunoprecipitace odhalil AHA na specifické jaderné antigeny.

Protilátky proti deoxyribonukleové kyseliny (DNA). Protilátky proti nativním (dvouřetězcová) DNA, zejména těch, které se detekují radioimunotestem testů (metoda Pharr), relativně specifická pro SLE. Jejich definice je zásadní pro posouzení aktivity onemocnění, předpovídat vývoj exacerbací a účinnost léčby. Protilátky proti denaturovaného (jedno-) DNA méně specifické pro SLE a jiných revmatických chorob často zjištěny.

Protilátky k histonů. Histony - základní součást, skládající se ze tří podjednotek: dva dimery H2A, H2B, že po stranách je NS-H4 tetramer a spojený s třetím podjednotka se skládá ze dvou závitů molekuly DNA.

Protilátky proti histonů H2A-H2B se nacházejí téměř ve všech pacientů s lék lupus syndromem (indukovaná novokainamidom), u pacientů léčených prokainamid, ale nemají příznaky lupus, stejně jako v 20% pacientů s SLE.

Protilátky k ribonucleoprotein (RNP). Protilátky proti ribonukleoproteinového obsahující anti-Sm, anti-snRNP (U1RNP), anti-Ro / SS-A, anti-La / SS-B, nalézt v SLE celkem více než protilátky proti dvouřetězcové DNA. koncentrace v krvi těchto protilátek je velmi vysoká. Nachází se v smíšeným onemocněním pojivových tkání, alespoň - u pacientů s SLE, který vede klinickou manifestaci kožních lézí, subakutní SSD a jiných autoimunitních revmatických onemocnění.

Protilátky proti Sm (Smith) -antigenu. Protilátky proti Sm-antigen se nachází pouze v SLE. Použití imunofluorescenční metodou jsou uvedeny v 30% případů a 20% - podle metody hemaglutinace. Protilátky proti Sm-antigen není detekována v jiných revmatických onemocnění, takže jsou považovány za markery SLE protilátek a jejich detekce je jedním z diagnostických kritérií pro onemocnění. V přítomnosti SM-protilátek je pozorováno u maligního onemocnění, centrálního nervového systému, lupus psychózy a relativní zachování funkce ledvin. Nicméně hladina protilátek proti Sm-antigenu nekoreluje s aktivitou a klinické subtypy SLE.

Protilátky proti Ro (Robert) / SS-A jsou namířeny proti jaderným ribonukleoproteinů, které jsou spojeny s Yl-Y5 cytoplazmatické RNA transkribované RNA polymerázou III. V závislosti na citlivosti použitých metod pro studium protilátek Ro / SS-A jsou uvedeny v 60-78% pacientů s Sjögrenova syndromu, v 96% pacientů s Sjogrenův choroby a 35-57% pacientů s SLE.

V SLE související produkce protilátek dat se specifickým souborem laboratorních a klinických projevů onemocnění: fotosenzitivita, Sjogrenův syndrom, poškození plic, lymfopenie a trombocytopenie hyperproduction RF. Zvýšení koncentrace protilátek proti Ro / SS-A v kombinaci s hyper IgM RF je často pozorován v ANF-negativní podtypu onemocnění (v 2-5% pacientů s SLE) - tzv subakutní kožní lupus.

Protilátky proti La (Lane) / SS-B namířené proti proteinu spojeného s transkripty RNA polymerázy III. Protilátky proti La / SS-B ve většině případů se vyskytuje ve spojení s protilátkami proti Ro / SS-A, zatímco druhý může dojít v izolaci. Protilátky proti La / SS-B se nacházejí v nemoci a Sjogrenův syndrom, v kombinaci s RA a SLE (ale ne systémové sklerodermie), a primární biliární cirhóza. V SLE protilátky proti SS-B / La-antigen je více pravděpodobné, že dochází v časných stádiích onemocnění, které se vyvíjí ve stáří, a je spojeno s nižším výskytem vývoje nefritida.

Scl-70 protilátky jsou obvykle detekovány v difuzní formou systémové sklerózy. V přítomnosti onemocnění Scl-70 protilátky v kombinaci s geny vozík HLA-DR3 / DRw52 17-násobné zvýšení rizika vzniku plicní fibrózu. Detekce Scl-70 protilátek u pacientů s izolovanou Raynaudovým syndromem ukazuje vysokou pravděpodobnost vzniku systémové sklerodermie.

Antitsentromernye protilátky (ASA) zjištěno 20% pacientů se systémovou sklerózou (většina z nich existují důkazy o CREST syndromu), alespoň - v primární biliární cirhózy (polovina z těchto pacientů jsou známky sklerodermie), a velmi zřídka - v chronické aktivní hepatitidy a primární plicní hypertenze. Protilátky proti centromery považována za pozitivní prognostický indikátor vývoje systémové sklerózy u pacientů s Raynaudovým syndromem.

Protilátky proti aminoatsilsintetaze tRNA (antisintetaznye protilátky) jsou detekovány v přítomnosti pacientů s polymyozitida intersticiální plicní nemoci. Obecně jsou detekovány syntetázy protilátky u 40% pacientů s polymyositis, 54% pacientů s idiopatickou dermatomyositidou v případě forem těchto onemocnění a pouze 6% pacientů s polymyozitidou, jeden z dalších projevů během nádoru DBST- myositida nejsou zjištěny tyto protilátky. Produkty antisintetaznyh protilátky je spojena s vývojem takzvaný „antisintetaznogo syndromu“.

Antifilaggrinovye protilátky (APL) jsou rodina, která zahrnuje antikeratinovye protilátky antiperinuklearny faktor protilátky Sa-antigenu a protilátky pro nedávno popsaný cyklický peptid citrulinu s obsahem. Podle moderní koncepce, hlavní antigenní determinanta rozpoznán těchto protilátek je citrulinovaných peptidů, které, zejména přítomen v synoviu pacientů s revmatoidní artritidou (RA). AFA jsou vysoce specifické pro RA. Nejpoužívanější jsou AFA v diagnóze časné RA. Několik studií prokázalo, agresivnější průběh RA v přítomnosti těchto protilátek u pacientů.

Protilátky proti fosfolipidů (APL) - heterogenní skupina autoprotilátek, které reagují s negativně nabitou (fosfatidylserin, fosfatidylinositol, kardiolipin) a neutrální (fosfatidylethanolamin, fosfatidylcholin) fosfolipidy. Ty zahrnují lupus antikoagulans, protilátky proti kardiolipinu a faktory, které určují vývoj falešné pozitivity Wasserman.

Lupus antikoagulant (LA) - imunoglobuliny třídy IgG a / nebo IgM, inhibují in vitro jeden nebo více fosfolipidzavisimyh koagulační reakce, BA je považována za reprezentativní rodiny protilátek proti fosfolipidů, jejich syntéza je spojena s rozvojem arteriální nebo žilní trombózy.

Antikardiolipinové protilátky (ACL). Pro určení CLA použité metody Immunoassay. CLA produkty (zejména při vysokých titrů IgG ACL), stejně jako tvorba BA, je spojen s rozvojem antifosfolipidového syndromu.

Falešně pozitivní Wassermann reakce je rychlá sérologická diagnostika syfilis pomocí metody založené na standardním suspenze flokulačního fosfolipidu (kardiolipin) pacientova séra, obsahující anti-protilátky proti treponemám (reagin). Pro přesnější diagnostiku syfilis pomocí imunofluorescenční metodou treponemálními antigen.

V 15-20% pacientů s SLE je detekován falešně pozitivní Wassermann reakci, a 30% zdravých jedinců s falešně pozitivní Wassermann reakce v následném vyvíjející SLE. Velmi často falešně pozitivní Wasserman zjištěna u pacientů s antifosfolipidovým syndromem.

Antineutrophil tsitoplazmatineskie protilátky (ANCA). ANCA jsou rodina autoprotilátek namířených proti specifickým antigenům přítomným v cytoplazmě neutrofilů. K dispozici jsou dva typy ANCA, které určovaly nepřímou imunofluorescenční metodou za použití pevných neutrofilů absolutní dárců alkohol. Protilátky způsobit difúzní proteinázy III (klasické) a cytoplazmatické záři označovaný jako K-ANCA nebo p-ANCA. Protilátky proti myeloperoxidázy, elastázy a laktoferin se vyznačují perinukleární typu emisí a označen jako perinukleární nebo p-ANCA. ANCA jsou často detekovány v systémové vaskulitidy.

Streptokoková infekce antistreptococcal způsobuje zvýšení titrů protilátek. Stanovení antistreptococcal protilátky jsou použity pro diagnózu akutní revmatické horečky (akutní revmatická horečka) a akutní glomerulonefritidy.

Nejrozšířenější stanovení protilátek proti streptolysin O (ASL-O), streptokináza (ACK) a streptodezoksiribonukleaze (anti-DNázy B). Zvýšení titrů SLA-O se vyskytuje ve více než 2/3 nemocných s akutní revmatické horečky, a pouze u poloviny pacientů s akutní glomerulonefritidou. Maximální titry antistreptococcal protilátky identifikované v průběhu vývoje artritidy a při vývoji Carditis a chorea titry těchto protilátek jsou významně sníženy, což snižuje diagnostickou hodnotu tohoto testu.

Důležité pro diagnózu jsou detekční reakce protilátek po infekci: Wassermann reakce vazby komplementu reakce s tuberkulózou, pseudotuberculosis, Yersinia, Shigelóza a další antigeny, HBs-antigenů, gonokokové (Bordet-Gengou reakce) a brucelóza (reakční Wright-Heddlsona) antigeny titru anti-Chlamydia protilátek.

Kryoglobuliny - skupina sérových proteinů s abnormální schopností reverzibilní vysrážením nebo tvorbou gelu při nízké teplotě. Kryoglobuliny může být detekována v různých chorob vnitřních orgánů, včetně poměrně často v systémových revmatických chorob.

V závislosti na složení kryoglobuliny je rozdělena do tří hlavních typů. Typu I se skládá z monoklonálních imunoglobulinů IgA nebo IgM, alespoň - monoklonální lehké řetězce (Bence Jones protein). Typ II (pozorováno v tzv smíšené kryoglobulinemie) složené z monoklonálního imunoglobulinu (obvykle IgM, zřídka - IgA nebo IgG), které mají aktivitu proti antiglobulinový polyklonální IgG. Typ III (pozorováno v tzv smíšené kryoglobulinemie) se skládá z jedné nebo více tříd polyklonálních imunoglobulinů. Nejběžnější forma kryoglobulinemie u revmatických chorob je ten typ III se nachází v SLE, RA, systémová skleróza, Sjogrenův syndrom.

Cirkulujících imunokomplexů (CIC). Zvyšující se koncentrace odráží CEC zánětlivé a imunologické aktivity patologického procesu v SLE, RA, séronegativní spondyloartropatie.

VI Mazur

Sdílet na sociálních sítích:

Podobné