Nepřímá diagnostika genetických chorob. Přesnost molekulární diagnózy možné zdroje chyb.

Nepřímá (nepřímý) přístup k molekulární diagnostiky Historicky je starší a univerzálnější. Je založen na analýze intra- a vnegennyh polymorfních míst. Jako druhý normálně vyčnívat krátkou sekvenci DNA stejných homologní oblasti chromozomu, které se liší v primární struktuře. Tyto diagnostické polymorfní místa mohou být umístěny buď v samotném genu nebo v jeho bezprostřední blízkosti.

Nezbytnou podmínkou pro diagnostiku nepřímé DNA Je to přítomnost v rodině nemocného dítěte nebo možnost studovat jeho DNA (krevní skvrny, histologické preparáty atd.) Stanovení obsahu informací zahrnuje identifikaci polymorfního místa, které mohou být použity jako molekulární marker pro diskriminaci jak mutantní a normální alely. V případě autosomálně recesivní onemocnění rodiče budou heterozygotní pro tento polymorfismus, a pacient - homozygot z jedné alely markeru. To heterozygozita pro molekulární polymorfismy definuje informační obsah určité vysoce rizikové rodiny narození dítěte s genetickou chorobou. V závislosti na rozdělení markerových alel na homologních chromozomů pacienta a jeho rodiče rodiny může být plně informativní pro DNA diagnostiku částečně informativní nebo neinformativní.

Je velmi důležité analyzovat rizikové rodiny je počet polymorfní místa jednoho genu, přesně určit, na nějaký konkrétní alely zděděné mutantního genu, a aby rodina plně informativní pro budoucí PD.

bod Výhodou nepřímé metody - možnost diagnostiky DNA bez přesné identifikace mutací v genu, a to i v nepřítomnosti přesných údajů o identifikaci a klonování mutovaného genu. Jeho významnou nevýhodou je nemožnost diagnózy v nepřítomnosti nemocného dítěte (nelze přesně určit, která polymorfní alely spojené mutantní gen), k chybě v diagnostice kvůli možnosti přejet během meiózy a nesoucí polymorfní místo na zdravém alely.

Přesnost molekulární diagnostika, možné zdroje chyb

Při provádění prenatální diagnóza molekulárních metod Je důležité mít na paměti, že dva hlavní zdroje chyb:
- kontaminaci vzorku fetální mateřské buňky;
- možnost přechodu nad při nepřímou metodou.

Vzhledem k velmi vysokému citlivost metody PCR, je důležité, aby se zabránilo kontaminaci vzorků fetálních tkání mateřské buňky. Čistota vzorku pro analýzu může bp dosáhnout pouze pečlivým výběrem placentární choriových klků nebo pod binokulární lupou, následným promytím fyziologickým roztokem. Je zvláště důležité, aby se zabránilo mateřské krve kontakt v případě plodu odběru pupečníkové krve od Kordocentéza. Vysoká kvalifikace lékaře operátorem a používání kvalitativních reakcích určit krevní nečistoty matky vyhnout této komplikaci. Riziko takových diagnostických chyb může výrazně varu umenshen při práci za sterilních podmínek.

Spolehlivost molekulární diagnostika metodou přímého, tj. identifikací mutací v genu je velmi vysoká a blíží absolutní. Nicméně s ohledem na celou řadu možných změn v genomu během zrání pohlavních buněk (crossing-over), a v časných stadiích embryogeneze (mutagenního účinku) je přesnější diagnostický index asi 99,9%. Značně obtížné vyhodnotit výsledky molekulární diagnostiku nepřímé metody. V případě registrace intragenní polymorfismů přesnost nepřímý diagnóza je poměrně vysoká, protože veličiny vnutritennogo přechodu obvykle ne více než 0,1% pro většinu známých genů.

Výjimkou může být pouze relativně velké geny, jako je například genu pro dystrofin, hemofilie A, neurofibromatóza, a další. Tak v případě, že pro dystrofin míry chybné diagnóze může být až 2%, což odpovídá vysoké mezní frekvence vnutritennogo (asi 2%) v této Giant genu (2200000 bp). Je také důležité vzít v úvahu stupeň příbuzné a nositeli tohoto pacienta, který tráví AP. Množství možného zvýšení chyby v případě, že značka alela není určena v sourozenci ovoce, zatímco jeho další příbuzné. Zejména by měly být pečlivě posoudit výsledky nepřímé diagnóze s použitím vnegennyh polymorfní lokusy. Předpokládá se, že s jistotou strávit AP v těchto případech může být pouze současné zkoušení několika polymorfních míst obklopujících mutovaný gen. Obvykle se používá pro molekulární diagnostické markery, frekvence rekombinace, které mutantní alely je menší než desetin nebo setin procenta. DNA polymorfismy charakteristické sekvence primerů pro PCR, nepřímé metody chybových hodnot pro různé onemocnění diagnostikováno prenatálně jsou shrnuty v hodnocení a monografiích.